Dag
¼
Rening
av rek. plasmid + Konc. och renhetsbestämning av plasmidprepav plasmidprepen och verifiera dess renhet genom absorbansmätning.
Vilka föroreningar har du förhoppningsvis tagit bort?
I det här fallet, alla komponenter av bakteriecellerna förutom pDNA är i princip föroreningar. Föroreningarna som har tagits bort är kromosomalt DNA, celldebris, proteiner så väl som RNA.
Vad vet du om resultatet? Fick du ren plasmid?
Absorbansen (abs) av 100x sp. plasmidlösning mätes
mellan 230-300nm. Vid 260nm där nukleinsyror har sin abs. max var abs.= 0,054 (Fig.
1). Däremot, vid 280nm där proteiner har sin max
abs. var abs. = 0,029 (Fig. 2).
Fig. 1 Absorbanskurva som visar absorbansvärdet vid 260nm.
Fig. 2 Absorbanskurva som visar absorbansvärdet vid 280nm.
Är det något du funderar på som du vill att vi tar upp vid genomgång nästa
labdag eller vid labuppföljningen?
Nej, inte för
tillfället.
Litteraturförteckning
1.
Karls,
M. Nordvall-Bodell, A. Laborationskompendium: Molekylärbiologisk metodik. Kursen:
Molekylärbiologi och Molekylärbiologisk metodik,
Karolinska Institutet, HT 2012.
Hej
SvaraRaderaJag tror att om du skriver rena istället för separerat. Och en ren plasmidprep skall ge en kvot mellan 1,8-1,9 enligt kompendie, annars är allting bra.
Ja, det är sant att det står att en ren plasmidprep ska ge en kvot mellan 1,8-1,9, men detta ändrades under laborationens gång. En kvot mellan 1,6-1,9 är också acceptabel :)
RaderaHej! Fint att du har med litteraturförteckning! =) Jag tänkte på att du har missat ta med beräkningen av koncentrationsbestämmingen, kan du lägga till om du vill.
SvaraRaderaJa, absolut :)
RaderaHär kommer den...
C(pDNA) = 0,054 x 0,05µg/µL x 100 ≈ 0,27µg/µL
Hej Melat!
SvaraRaderajag skulle önska att du var tydligare med vad vi vet om renheten. Vad menar du med att plasmiden är "mer eller mindre ren"? Det hade varit bättre om du skrivit vilka föroreningar vi fortfarande inte kontrollerat. Dessa vet vi inget om än.
Jag tycker det är utmärkt att säga att du har separerat plasmid från övrigt cellinnehåll. Soad du tänker kanske på att jag sa att man inte kan säga att man "separerat en plasmid". Man har alltid separerat något från något annat, det skrev Melat. Separera betyder att man delar på något i två eller flera delar.
Märit