Dag 2/4

PCR + Gelektrofores + Klyvning av pDNA

Syfte: Bekräfta att vi har en rek. plasmid samt verifiera att inserten är LL37 (PCR + gelelektrofores). Klyva pDNA med EcoR1 för att separera vektorn och inserten (klyvning).                     

Hur blev resultatet? Om du tycker att resultatet blev bra; vilka kontroller har du som gör att du kan lita på resultatet?

Efter genomförd elektrofores, ställdes gelen i ett UV-kabinett och fotograferades (Fig. 1).

 Fig. 1 Foto av elektroforesgel. 

  Brunn 1: Markör III

    Brunn 2: Plasmidprep

         Brunn 3: Negativ kontroll

           Brunn 4: Prov (Amplifikat)

        Brunn 5: Positiv kontroll

Brunn 6: Markör IX

                                                                                                                

Resultatet blev positivt. LL-37 finns i rek. pDNA som renades från E.coli. bakterierna.

Resultatets tillförlitlighet kontrollerades mha. en positiv så väl som negativ kontroll. En negativ kontroll användes för att bekräfta att resultatet inte är falskt positivt pga. "carry over" kontamination.  Ingen band syns i spalt 3 motsvarande den negativa kontrollen, detta tyder på att ingen "carry over" kontamination har skett. Den positiva kontrollen är amplifierade produkten av en känd LL-37 gen. I både spalt 4 och 5 finns ett tjockt band på ca 550bp motsvarande LL37 genen. Detta är ytterligare ett bevis på att systemet har fungerat bra/som det ska och att det positiva resultatet är tillförlitligt.

Är det något du funderar på som du vill att vi tar upp vid genomgången nästa labdag eller vid labuppföljningen?

Nej, inte för tillfället.